Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:54 min. • April 28th, 2025
Comece com seções do cérebro de camundongos expondo o hipocampo dorsal, rico em neurônios.
Adicione peróxido de hidrogênio para extinguir a atividade da peroxidase neuronal, seguido de lavagem.
Trate com um tampão de permeabilização e, em seguida, aplique um tampão de bloqueio para bloquear a ligação não específica.
Adicione os anticorpos primários e incube com agitação. Esses anticorpos se ligam a proteínas marcadoras de ativação neuronal.
Lave e aplique anticorpos secundários conjugados com biotina para ligar os anticorpos primários.
Enxágue e introduza um complexo avidina-biotina-peroxidase que se liga à biotina nos conjugados.
Lave novamente e adicione um substrato cromogênico, que é oxidado pela peroxidase para gerar um precipitado marrom. Pare a reação com PBS.
Transfira as seções para uma lâmina revestida de gelatina e desidrate-as usando concentrações crescentes de etanol. Em seguida, limpe as seções em xileno e monte-as.
Coloque a lâmina sob um microscópio de campo claro.
Sob iluminação de luz, regiões não coradas transmitem luz e parecem brilhantes, enquanto neurônios corados absorvem e refletem a luz e parecem mais escuros.
A área mais escura distinta indica ativação neuronal
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