Imagem in vivo de dois fótons da retina de camundongos

Pegue um camundongo transgênico anestesiado com a cabeça presa em um ângulo em um suporte para imagens in vivo da retina do camundongo.

A retina contém células ganglionares da retina, ou RGCs, expressando uma proteína marcada com fluoróforo.

Aplique lubrificante para os olhos e monte uma lamínula sobre o olho.

Sob um microscópio, ilumine uniformemente a retina para excitar as proteínas fluorescentes nos RGCs.

Usando a fluorescência emitida, obtenha uma visão de campo amplo dos RGCs do plano focal e dos RGCs fora de foco.

Mude para o modo de imagem de dois fótons, focando a luz infravermelha próxima de baixa energia na camada RGC.

No ponto focal, a energia combinada de dois fótons excita o fluoróforo, que então libera energia como fluorescência.

Como a excitação está confinada a um único ponto, a fluorescência de outros planos focais é minimizada.

Capture imagens em vários planos focais ao longo do eixo z para criar imagens de toda a camada RGC.

Aplique colírios lubrificantes em ambos os olhos do mouse. Gire o braço principal do suporte da cabeça até que a pupila de um olho esteja orientada alinhada com o caminho da luz e coloque uma lamínula número 1.5 no porta-filtro compacto. Depois de