Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:48 min. • May 29th, 2025
Comece com uma configuração de microscópio de fluorescência contendo um diafragma imobilizado com nervos frênicos de um camundongo transgênico.
A junção neuromuscular do diafragma consiste em um neurônio motor, uma fibra muscular e células de Schwann contendo receptores de acetilcolina e canais de cálcio.
Essas células têm receptores de acetilcolina marcados com fluorescência e expressam indicadores de cálcio intracelular.
Um divisor de imagem conectado à configuração permite a visualização simultânea de ambos os sinais fluorescentes.
O nervo frênico é posicionado em um eletrodo de sucção para fornecer estímulo elétrico.
Sob o microscópio de fluorescência, visualize os receptores de acetilcolina para identificar uma junção neuromuscular.
Para definir uma fluorescência basal máxima, adicione uma solução de cloreto de potássio para despolarizar a membrana celular temporariamente. Isso desencadeia o influxo intracelular de cálcio, causando um aumento na fluorescência dos indicadores.
Ajuste as configurações de brilho para evitar a saturação excessiva do sinal de fluorescência.
Após a repolarização, aplique estímulos elétricos para desencadear o influxo de cálcio na célula e registre a mudan
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