Microscopia de dois fótons de astrócitos e neurônios excitatórios em um tecido hipocampal de camundongo limpo

Comece com um tecido hipocampal de camundongo limpo tornado opticamente transparente pela remoção de lipídios. O tecido é incorporado em uma malha de hidrogel para estabilizar as biomoléculas e preservar as estruturas celulares.

O tecido contém astrócitos que expressam proteína fluorescente vermelha e neurônios excitatórios que expressam proteína nuclear verde, permitindo uma visualização distinta.

Coloque o tecido em uma lâmina e crie uma câmara usando cola quente, deixando uma pequena lacuna.

Aplique uma solução de correspondência de índice de refração para hidratar o tecido e evitar bolhas, depois sele com uma lamínula.

Encha a câmara com uma solução de correspondência de índice de refração para reduzir a dispersão de luz e fechar a lacuna.

Visualize o tecido usando um microscópio de dois fótons.

A luz infravermelha próxima excita as proteínas fluorescentes vermelhas e verdes no plano focal, permitindo imagens de alta resolução com fotodano mínimo. As emissões de fluorescência são detectadas separadamente, revelando claramente a proximidade espacial entre os astrócitos e os núcleos dos neurônios excitatórios.

Primeiro, coloque a amostra no meio do slide. Usando cola quente, crie