Imagem simultânea da dinâmica microglial e atividade neuronal em um camundongo acordado

Comece com um camundongo transgênico preso em uma estrutura estereotáxica, com uma janela craniana implantada sobre seu córtex visual.

O camundongo expressa EGFP na microglia e R-CaMP, um indicador de cálcio fluorescente vermelho, nos neurônios do córtex visual.

Posicione o mouse sob um microscópio de dois fótons e ajuste a lente objetiva para focar na superfície do cérebro.

Mova o mouse com a moldura estereotáxica da lente objetiva e conecte um dispositivo de sombreamento.

Encha o dispositivo de sombreamento com água e reposicione o mouse sob o microscópio.

Cubra a lente com folha preta.

O dispositivo de sombreamento e a folha bloqueiam a interferência da luz externa, garantindo imagens precisas.

Coloque um monitor LCD na frente do olho do mouse para fornecer estimulação visual.

Defina os parâmetros de imagem e comece a criar imagens.

A estimulação visual desencadeia a excitação neuronal, levando ao influxo de cálcio e a um aumento na fluorescência do R-CaMP.

Enquanto isso, a microglia retrai seus processos enquanto interage com os neurônios ativados, conforme observado por meio de imagens ao vivo.

Para instalar o dispositivo de sombreamento personalizado e um monitor LCD para estimulaç