Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 6:00 min. • May 29th, 2025
Pegue fatias de cérebro de hipocampo de um rato injetado com bromodeoxiuridina, ou BrdU, um análogo de nucleosídeo da timidina.
O BrdU se integra ao DNA durante a divisão celular, rotulando neurônios recém-gerados dentro do giro denteado, uma região para neurogênese.
Incubar com um agente oxidante para inativar as enzimas peroxidase endógenas.
Trate com ácido para desnaturar o DNA e expor o BrdU, depois neutralize o ácido.
Incubar com um detergente para permeabilizar as membranas celulares e uma solução de bloqueio para mascarar locais de ligação não específicos.
Incubar com anticorpos primários direcionados ao BrdU, seguidos por anticorpos secundários marcados com peroxidase específicos para os anticorpos primários.
Introduza um substrato cromogênico e um agente oxidante, permitindo que a peroxidase converta o substrato em um resíduo colorido.
Monte o tecido e contra-core com um corante de ligação ao ácido nucleico.
Desidrate o tecido e trate-o para aumentar a transparência.
Sob um microscópio, identifique o giro denteado.
Usando a técnica do fracionador óptico, analise vários planos ao longo da espessura do tecido para quantificar os neurônios marcados com BrdU.
Quando estiver pronto para
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