Imagens ao vivo do olho de pupa de Drosophila usando microscopia de fluorescência

Comece com uma pupa de Drosophila transgênica com o olho exposto.

Coloque a pupa em uma conta de gelatina dentro de uma moldura de papel hidratado, cercada por um anel de gelatina.

O olho da pupa contém proteínas de junção marcadas com GFP que destacam os limites celulares no neuroepitélio do olho em desenvolvimento.

Pressione suavemente uma lamínula na região do olho da pupa.

Sob um microscópio fluorescente, as junções marcadas com GFP fluorescem, exibindo a organização do neuroepitélio.

Tire imagens em intervalos regulares em diferentes profundidades e processe as imagens para melhorar o contraste e minimizar o ruído de fundo.

Alinhe essas imagens com intervalos de tempo crescentes para rastrear o neuroepitélio em desenvolvimento.

Inicialmente, as células primárias formam limites em torno de aglomerados de células fotorreceptoras, enquanto as células interomatidiais ou CIs se organizam em uma única camada.

Posteriormente, os CIs se diferenciam em células secundárias e terciárias próximas aos fotorreceptores.

Finalmente, o excesso de CIs é removido por meio da morte celular programada, formando uma rede hexagonal que estrutura o olho organizado.

Usando uma pinça, levante e remova cuidados