Investigando as origens dos neurônios sensoriais na dura-máter usando microscopia de fluorescência

Pegue um rato anestesiado com o crânio exposto coberto por uma cortina.

Faça um furo para expor a dura-máter, a camada mais externa do cérebro, inervada por neurônios sensoriais sensíveis à dor originários do gânglio do trigêmeo e dos gânglios da raiz dorsal cervical.

Construa uma barreira para evitar vazamentos, introduza um traçador retrógrado e vede o orifício.

Suture a ferida e permita que o rato se recupere.

O traçador entra nos axônios neuronais sensoriais, viaja retrógradamente para seus gânglios e entra nos corpos celulares neuronais.

Eutanasiar o rato e dissecar os gânglios.

Prepare seções dos gânglios e monte-as em lâminas.

Adicione uma solução para permeabilizar as membranas celulares e mascarar locais de ligação não específicos.

Incubar com anticorpos primários direcionados ao marcador e neuropeptídeos específicos do neurônio sensorial.

Adicione anticorpos secundários marcados com fluorescência específicos para os anticorpos primários.

Usando microscopia de fluorescência, observe a colocalização de neuropeptídeos e traçadores dentro dos corpos celulares, confirmando a origem ganglionar dos neurônios sensoriais.

Raspe a cabeça do rato com um barbeador elétrico. Em seguida, coloqu