Visualizando a morfologia dos astrócitos usando iontoforese de corante fluorescente em uma fatia de cérebro de camundongo fixa

Coloque uma fatia de cérebro de rato quimicamente fixada em um prato com fundo de vidro contendo tampão e prenda-a com uma tela.

Conecte um eletrodo preenchido com um corante fluorescente hidrofílico aniônico a uma fonte de tensão.

Insira um eletrodo de aterramento no buffer para completar o circuito elétrico.

Usando iluminação de campo claro, avance o eletrodo preenchido com corante em direção à fatia.

Mude para imagens de contraste de interferência diferencial infravermelha para localizar um astrócito.

Perfure o soma do astrócito com o eletrodo para acessar o citoplasma.

Aplique uma corrente elétrica para conduzir o corante para o citoplasma por meio de iontoforese.

Mude para microscopia confocal para monitorar o movimento do corante.

O corante hidrofílico, incapaz de atravessar a membrana hidrofóbica, difunde-se dentro do citoplasma para preencher o soma e os ramos.

Assim que a célula estiver cheia, pare a corrente e retire o eletrodo.

Deixe a membrana do astrócito selar novamente.

Adquira imagens em vários planos Z e reconstrua-as para visualizar a morfologia dos astrócitos.

Para o teste de injeção de corante, coloque delicadamente uma fatia de cérebro levemente fixada em um prato com fu