Visualização do influxo de cálcio em neurônios do mesencéfalo ventral derivados de embriões de camundongos

Pegue uma lamínula com uma cultura de neurônios do mesencéfalo ventral derivados de embriões de camundongos.

As células são infectadas com um vetor viral para expressar um indicador de cálcio.

Transfira a lamínula para a câmara de registro de um microscópio confocal perfundido com um tampão de registro.

Usando luz visível, identifique uma região contendo vários neurônios e, em seguida, mude para imagens de fluorescência.

Em baixos níveis de cálcio intracelular, o indicador permanece não ligado, exibindo baixa intensidade de fluorescência.

As propriedades intrínsecas dos neurônios geram potenciais de ação espontâneos, fazendo com que os canais de cálcio dependentes de voltagem se abram e permitam o influxo de cálcio.

O excesso de cálcio se liga ao indicador, induzindo uma mudança conformacional que aumenta a intensidade da fluorescência.

Registre a intensidade da fluorescência ao longo do tempo para rastrear a atividade espontânea do cálcio.

Introduza um neurotransmissor em alta concentração, que se liga a receptores nos neurônios, gerando potenciais de ação contínuos.

A ativação sustentada do canal de cálcio dependente de voltagem prolonga o influxo de cálcio, causando um aumento sustentad