Imagem de cálcio in vitro em culturas de hipocampo de rato de curto e longo prazo

Pegue uma cultura neuronal de hipocampo de rato de curto prazo representando neurônios jovens e uma cultura de longo prazo representando neurônios envelhecidos.

Os neurônios envelhecidos exibem uma densidade mais alta de canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L, ou L-VGCCs, que permanecem abertos por mais tempo após a despolarização da membrana.

Incube com um indicador fluorescente de cálcio que se difunde nas células e, em seguida, lave para remover qualquer excesso de corante.

Colocar as culturas numa câmara de perfusão ao microscópio de fluorescência.

Introduza uma solução contendo neurotransmissores que se ligam a receptores nos neurônios, induzindo o influxo de íons de sódio e desencadeando a despolarização da membrana.

A despolarização ativa os L-VGCCs, permitindo o influxo de cálcio no citoplasma.

Na cultura de longo prazo, a maior densidade e a abertura prolongada de L-VGCCs levam à sobrecarga de cálcio, uma marca registrada do envelhecimento neuronal.

A ligação do cálcio ao indicador gera fluorescência, com neurônios envelhecidos exibindo maior intensidade de fluorescência, refletindo o aumento dos níveis de cálcio intracelular após a estimulação.

Neste procedimento, in