Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:14 min. • May 29th, 2025
Comece com seções cerebrais de um modelo de camundongo neurodegenerativo.
Incube com uma solução de bloqueio suplementada com detergente para aumentar a permeabilidade do tecido e bloquear a ligação não específica. Descarte a solução.
Introduzir anticorpos primários direcionados a placas beta-amiloide. Incube com agitação para que os anticorpos interajam com as placas beta-amilóide e, em seguida, lave.
Adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo vermelho e incube no escuro para permitir que os anticorpos interajam.
Lave para remover anticorpos não ligados, seguido de uma lavagem com álcool.
Adicione a curcumina, que se liga aos amiloides ricos em folhas beta com alta afinidade, e lave.
Em seguida, trate com concentrações crescentes de álcool, desidratando as seções cerebrais. Adicione xileno para remover quaisquer vestígios de reagentes.
Monte uma seção em uma lâmina e observe sob um microscópio de fluorescência.
Use um laser de comprimento de onda de 590 nanômetros para excitar os fluoróforos vermelhos nos anticorpos secundários. Capture a imagem.
Mude para um laser de comprimento de onda de 480 nanômetros para excitar a curcumina, emitindo fluorescência verde.
Sobreponha as
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