Visualização tridimensional de uma infecção pelo vírus da raiva no tecido cerebral de camundongos

Pegue uma seção cerebral grossa fixa de um camundongo infectado com o vírus da raiva.

O vírus infecta neurônios e se replica, resultando em proteínas virais presentes nas células.

Trate com um detergente para permeabilizar as membranas celulares e uma solução de bloqueio para mascarar locais de ligação não específicos.

Incubar com anticorpos primários direcionados às proteínas virais, seguidos por anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.

Trate com um corante fluorescente de ligação a ácidos nucleicos para rotular o núcleo.

Desidrate o tecido em concentrações crescentes de álcool e, em seguida, aplique uma solução de limpeza para aumentar a transparência do tecido para imagens.

Monte a seção em uma câmara de imagem, encha-a com a solução de limpeza e feche-a.

Usando microscopia confocal de varredura a laser, crie imagens do tecido separadamente usando as etiquetas fluorescentes e, em seguida, mescle-as para criar uma imagem bidimensional.

Adquira imagens em diferentes planos focais em todo o tecido e combine-as para gerar uma representação tridimensional para avaliar a progressão da infecção.

Para imunocoloração das seções do tecido cerebral, l