Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:40 min. • May 29th, 2025
Pegue um segmento de tecido quimicamente fixado e limpo de um embrião de camundongo transgênico expressando proteína fluorescente verde (GFP) em neurônios motores espinhais.
Monte o tecido verticalmente em uma ponta de pipeta modificada.
Prenda a ponta a um capilar preso dentro do microscópio de fluorescência de folha de luz.
Coloque uma câmara de amostra cheia de tampão sob o tecido para mergulhá-lo e limpar os detritos.
Usando um software de imagem, alinhe o tecido no caminho da luz.
Inicie a aquisição da imagem.
A fonte de luz emite uma fina folha de luz laser, excitando GFPs em um único plano do tecido para emitir fluorescência.
Um detector posicionado perpendicularmente ao caminho da luz captura a fluorescência emitida.
Adquira imagens dos neurônios motores espinhais para gerar uma reconstrução 3D da morfologia da ramificação axonal.
Use software para mapear axônios, identificando padrões de ramificação e endpoints para avaliar o crescimento e a conectividade dos neurônios motores.
Configure a óptica de iluminação 5X/0.1 e a óptica de detecção 5X/0.16. Monte o porta-amostras e o capilar da amostra. Preparar a câmara de recolha de amostras enchendo-a com uma solução de limpeza. Para mo
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