Imagem histoquímica de módulos corticais em seções cerebrais achatadas

Comece com seções tangenciais pré-fixadas das seções corticais do cérebro achatadas. Lavar para remover os vestígios de fixação.

Manjar as secções com uma solução de diaminobenzidina ou DAB e sulfato de níquel-amónio.

O

DAB difunde-se nos neurónios corticais e reage com a citocromo oxidase nas mitocôndrias, formando um precipitado escuro. O sulfato de níquel-amônio escurece o precipitado, aumentando o contraste.

Adicione paraformaldeído para interromper a reação de coloração e depois enxágue.

Monte as seções em uma lâmina e desidrate-as com lavagens com etanol.

Enxágue com isopropanol e xileno para limpar a seção e melhorar a transmissão de luz.

Aplique um meio de montagem e coloque uma lamínula nele.

Quando fotografados sob um microscópio de campo claro, dentro dos neurônios corticais, os precipitados absorvem e espalham a luz, fazendo com que pareçam escuros.

Em contraste, áreas limpas e sem manchas transmitem luz e parecem brilhantes.

Esse contraste destaca os módulos corticais como estruturas escuras e irregulares contra um fundo mais claro, representando clusters neurais ativos envolvidos no processamento de informações sensoriais.

Lave o tecido de corte em tampão HEPES por 15 min