Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:38 min. • May 29th, 2025
Pegue células isoladas de nervos ciáticos de camundongos e gânglios da raiz dorsal ou DRGs.
Incube com anticorpos marcados com fluoróforo contra CD45 e CD11b e com anticorpos marcados com biotina contra MHC classe II, para marcar células imunes.
Incubar com estreptavidina marcada com fluoróforo que se liga à biotina.
Trate com um fixador para estabilizar a estrutura celular.
Introduza um tampão de permeabilização com uma coloração de DNA fluorescente para permeabilizar as membranas e rotular os núcleos.
Usando um citômetro de fluxo, passe as células pelo feixe de laser para avaliar as características ópticas e de fluorescência.
Remova agregados com maior fluorescência de DNA para isolar células individuais e detectar a fluorescência dos marcadores.
Identifique as células que expressam CD45, um marcador característico das células imunes, confirmando sua presença.
A maioria das células CD45-positivas no DRG expressa CD11b e MHC classe II, indicando células semelhantes à microglia, que estão ausentes nos nervos ciáticos.
Essa técnica complementa a imagem para analisar a heterogeneidade das células imunes nos tecidos nervosos.
No computador, selecione os canais apropriados para detecção dos fl
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