Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:19 min. • May 29th, 2025
Comece com uma seção de tecido cerebral de camundongo contendo a região de interesse em um tampão para manter a hidratação durante a imagem.
O tecido é obtido de um modelo de camundongo com doença de Alzheimer injetado com metoxi X04, um corante fluorescente.
O Methoxy X04 liga-se especificamente a estruturas de folha β-plissadas em placas amilóides e retém sua fluorescência para imagem e análise.
Usando um microscópio fluorescente com filtro UV, excite o metoxi-X04 e capture a fluorescência emitida para visualizar placas amilóides marcadas com fluorescência contra o tecido circundante.
Sem ajustar a platina do microscópio, capture imagens da mesma região no modo de campo claro para detalhar a estrutura do tecido e o modo de fluorescência para visualizar as placas.
Alinhe as imagens de campo claro e fluorescentes usando um software de processamento de imagem para mapear com precisão as placas nas estruturas anatômicas.
Essas imagens fornecem visualização detalhada das placas amilóides dentro de seu contexto estrutural para estudar a patologia da doença de Alzheimer.
Com a ajuda de um atlas cerebral de camundongo estereotáxico, selecione as seções cerebrais contendo a região de interesse e coloque cada seção em crioprotetor em um poço de uma placa de cultura de 24 poços. Em seguida, use uma pipeta descartável para adicionar uma gota de PBS em uma lâmina de microscópio e, em seguida, coloque a seção na gota.
Examine a seção sob um microscópio fluorescente para identificar regiões contendo placas A-beta marcadas com metoxi-X04. Sem mover a platina do microscópio, capture imagens das regiões de interesse no campo claro, bem como no modo de fluorescência. Cada imagem deve mostrar a mesma região em ambos os campos para correlacionar a placa com a região estrutural da seção de tecido.
Salve e nomeie as imagens tiradas de acordo com o número do animal. Além disso, registre o número do poço na placa e o campo das fotos tiradas. Coloque a seção de volta no poço designado assim que a imagem for concluída. Examine a próxima seção na sequência usando o mesmo procedimento para evitar secar as seções.
Para alinhar as imagens, abra as imagens de campo claro e campo UV para obter o mesmo ROI na imagem J. Em seguida, use o mosaico J Plugin para alinhar as bordas das duas imagens. Salve a imagem alinhada e combinada de acordo com o número do poço em uma pasta, com o número do animal em particular. Combine as imagens de diferentes seções do mesmo animal para identificar e localizar as placas na região de interesse.