Imagens TSPO-PET/CT para detectar a formação de infarto em um modelo de camundongo com AVC isquêmico

Tome camundongos controle anestesiados e camundongos com fluxo sanguíneo restrito para o córtex somatossensorial.

Essa restrição causa morte neuronal e formação de infarto no cérebro, desencadeando a ativação microglial e a infiltração de células imunes periféricas.

As células imunes superexpressam a proteína translocadora mitocondrial (TSPO).

Prenda os mouses na base do scanner PET/CT.

Execute uma tomografia computadorizada usando uma fonte rotativa de raios-X que passa raios-X pelo corpo do mouse.

Um detector captura os raios-X e os processa em imagens dos principais marcos anatômicos.

Injete um radiotraçador TSPO através da veia da cauda.

O radiotraçador viaja para a área do infarto e se liga ao TSPO nas células imunológicas.

Execute uma varredura PET.

O radiotraçador sofre decaimento de pósitrons, emitindo pósitrons que colidem com elétrons próximos para produzir raios gama.

Um detector captura esses raios e reconstrói uma imagem 3D da distribuição do radiotraçador.

Visualize as imagens de PET/CT sobrepostas para identificar áreas de infarto com maior captação de traçadores.

Comece posicionando os camundongos anestesiados de bruços na cama do scanner PET/CT, garantindo que estejam endireitados e seguros nos cones do nariz. Prenda a cabeça e o corpo de cada camundongo na cama com fita cirúrgica macia, garantindo que a respiração não seja restringida pela colocação da fita. Quando os animais estiverem seguros na cama e a respiração estiver estável, ligue a mira do laser e mova a cama de varredura para que eles se alinhem com o cérebro de todos os quatro camundongos.

Mova a base do scanner para a posição de aquisição com os cérebros dos camundongos o mais próximo possível do centro do campo de visão. Adquira uma imagem de visualização de reconhecimento dos mouses para verificar sua posição e ajuste a posição arrastando a caixa de campo de visão na interface, se necessário. Por fim, clique em Iniciar fluxo de trabalho no software do scanner para iniciar a tomografia computadorizada, certificando-se de selecionar Exibir prompts interativos do usuário, para que a varredura PET possa ser iniciada manualmente antes da injeção do traçador.

Assim que os camundongos avançarem automaticamente da TC para a PET, configure a parte traseira do scanner para a injeção do radiotraçador. Coloque o acolchoamento absorvente protetor em uma borda e certifique-se de que a tesoura e o isqueiro estejam à mão. Corte o tubo selado do cateter com uma tesoura. Verifique se as linhas do cateter estão livres de bolhas e confirme se a cânula ainda está dentro da veia realizando uma lavagem com solução salina de 10 a 20 microlitros. Em seguida, carregue seringas de dose previamente medidas em cada um dos quatro cateteres, acompanhando qual dose foi administrada a cada camundongo.

Clique em OK quando o PET scan estiver pronto para iniciar, ao mesmo tempo em que inicia um temporizador de 10 segundos. Tenha dois pesquisadores na parte de trás do scanner, com as seringas de dose na mão para injetar todos os quatro camundongos simultaneamente quando o cronômetro chegar a zero. Lave cada cateter com 50 a 100 microlitros de solução salina para garantir que a dose completa entre na veia da cauda e feche novamente o tubo usando um isqueiro.

Em seguida, meça as seringas de dose usando um calibrador de dose para obter um valor de radioatividade residual. Anote os valores e a hora em que são registrados. Quando a varredura estiver concluída, retorne a cama PET à posição original usando o botão home horizontal no painel de controle de movimento. Remova os mouses do scanner e remova cuidadosamente o cateter. Aplique pressão suavemente no local da canulação para evitar sangramento excessivo. Em seguida, meça a atividade residual no cateter usando um calibrador de dose.

Por fim, reconstrua os dados abrindo o software de gerenciamento de pós-processamento, que reconstruirá automaticamente cada varredura usando os dados do histograma gerados a partir do primeiro arquivo. Para análise PET, comece abrindo o software de análise de imagem. Clicando no ícone Dados abertos para carregar a imagem do TC. E selecionando o ícone de anexar dados para carregar o PET dinâmico. Execute um controle de qualidade visual dos dados por meio do operador de série temporal no menu suspenso. Selecione Referência e Global e aplique um Mín e Máx apropriados para a escala de cores.

Visualize os dados PET dinâmicos quadro a quadro, verificando a captação de radioatividade e verificando se há confusão de movimento na varredura. Em seguida, crie uma imagem PET média usando a função aritmética. Escolha Média selecionada, desmarque Referência e certifique-se de inserir um. A entrada dois e a estrela de entrada são selecionadas para criar uma média de todos os quadros PET.

Vá para a guia Gerenciador de dados e arraste a imagem média para cima até a posição de entrada para permitir a visualização do sinal PET usando a imagem PET média. Em seguida, redistribua a escala de cores clicando no Cálculo automático na ferramenta MinMax. Em seguida, registre o CT no arquivo PET médio usando a função 3D automática. No menu suspenso Registro de reorientação, selecione Ref e insira 1 e escolha Rigid Fast insira um para o registro de referência.

Verifique visualmente o registro em todas as três dimensões e ajuste manualmente, se necessário, na guia 3D manual usando as funções de translação e rotação. Quando estiver satisfeito com o registro, selecione Entrada 2 e Estrela de entrada e aplique-as a todas as molduras de animais de estimação clicando na marca de seleção. Clique com o botão direito do mouse nos arquivos CT e PET no DM e salve como raw. Em seguida, selecione Corte no menu suspenso e arraste os limites da imagem para cortar a cabeça de um mouse de cada vez abaixo do tronco cerebral.

Reoriente manualmente as imagens PET e CT para que o crânio fique reto em todas as dimensões. Carregue a imagem MR para esse mouse usando o botão anexar dados no canto superior esquerdo da interface. Mova o MR usando a reorientação 3D manual e ajuste-o ao crânio dentro da imagem de TC. Em seguida, desative a visualização PET desmarcando-a na guia do controlador visual e use apenas o MR e o CT para desenhar a região de interesse ou ROI.

Na ferramenta ROI 3D, clique no botão Adicionar ROI para criar um novo ROI e nomeá-lo infarto. Selecione a ferramenta spline, clique com o botão esquerdo para desenhar a borda do ROI e clique com o botão direito do mouse para fechá-la. Depois disso, crie um novo ROI e rotule-o como contralateral. Clique com o botão direito do mouse no ROI do infarto e selecione Exportar. Em seguida, mova o ROI para a posição 2, insira um, para permitir a visualização e a reorientação manual do novo ROI.

Com apenas uma entrada selecionada, marque a caixa ROI e escolha View Only para permitir a visualização do ROI do infarto sem reorientá-lo. No menu de registro de reorientação, aplique um flip esquerdo e direito usando a função do operador e mova manualmente o novo ROI para a mesma região no lado contralateral. Em seguida, selecione o operador aritmético e aplique uma multiplicação escalar de 2 ao novo ROI, permitindo a quantificação independente dos ROIs.

Retorne à ferramenta ROI 3D. Vá para a guia Exportar e experimental e clique no botão Importar ROI. Selecione a entrada um na caixa de diálogo para carregar o novo volume como o ROI contralateral. Por fim, clique com o botão direito do mouse na imagem do PET médio, descarregue-a e ligue o PET novamente. Gere os resultados de absorção quantitativa usando o ícone de exportação de resultados na ferramenta ROI 3D.