Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:16 min. • May 29th, 2025
Pegue uma cultura de células precursoras de oligodendrócitos (OPCs), isoladas de um cérebro de filhote de rato, que foram induzidas a se diferenciar em oligodendrócitos. As células são fixadas para preservar a arquitetura celular.
Os oligodendrócitos diferenciados expressam a proteína básica da mielina, ou MBP, um marcador de oligodendrócitos maduros, enquanto as OPCs e as células diferenciadas expressam o fator de transcrição de oligodendrócitos 2, ou Olig2.
Aplique uma solução de bloqueio de permeabilização e incube com agitação, permeabilizando as membranas celulares e bloqueando locais de ligação não específicos.
Adicione anticorpos primários direcionados aos marcadores e incube com agitação para permitir a ligação.
Lave para remover os anticorpos não ligados, adicione diferentes anticorpos secundários conjugados com fluoróforo específicos para os anticorpos primários e incube com agitação.
Lave as células e coloque-as em um sistema de imagem de fluorescência dupla.
Use luz de comprimentos de onda específicos para excitar os fluoróforos distintos e detectar os sinais emitidos para visualizar os marcadores.
Identifique oligodendrócitos diferenciados expressando olig2 e MBP entre os OP
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