Imagem de mitocôndrias neuronais usando um microscópio eletrônico de varredura serial de face de bloco

Pegue uma seção de tecido cerebral de camundongo aparada e embebida em resina contendo o hipocampo.

A seção é corada com metais pesados para aumentar o contraste sob um microscópio eletrônico.

Monte a seção em um pino de alumínio usando cola de cianoacrilato.

Cubra os lados do bloco com pasta de prata coloidal para criar um caminho condutor para o pino de alumínio.

Examine o bloco de tecido usando um microscópio eletrônico de varredura serial (SBFSEM).

Dentro do SBFSEM, o ultramicrótomo corta sequencialmente o bloco em camadas ultrafinas enquanto um feixe de elétrons de baixa voltagem varre a superfície exposta.

Um detector de elétrons retroespalhados captura imagens 2D de alta resolução, revelando mitocôndrias e estruturas celulares circundantes.

Usando o software apropriado, ajuste o brilho e o contraste para melhorar a clareza da imagem.

Alinhe as imagens sequenciais para reconstruir um volume 3D do tecido cerebral. Esta reconstrução 3D permite o mapeamento preciso da morfologia mitocondrial, distribuição espacial e suas relações dentro dos compartimentos neuronais.

Apare as amostras na área de interesse e monte-as em um pino de alumínio usando supercola de cianoacrilato gelificante