Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:33 min. • May 29th, 2025
Comece com um conjunto de perfusão colocado no palco de um microscópio invertido.
O conjunto de perfusão contém um nervo periférico dissecado preso entre uma lamínula e uma lâmina de microaqueduto com perfusão salina contínua.
Os axônios mielinizados do nervo expressam os neurofilamentos verdes marcados com fluoróforo.
Usando iluminação de campo claro, concentre-se nos axônios mielinizados.
Mude para o modo confocal, fotobranqueie com alta potência do laser e, em seguida, capture uma imagem de referência de baixa autofluorescência usando baixa potência do laser.
Desenhe linhas paralelas ao longo do axônio para definir o comprimento da janela de fotoativação. Use isso como um guia para criar uma região de ativação retangular.
Ilumine esta região com um comprimento de onda específico para ativar os neurofilamentos marcados com fluoróforo verde, fazendo com que eles fluoresçam. Adquira a imagem.
Após a ativação, capture imagens com lapso de tempo.
Com o tempo, os neurofilamentos fluorescentes se movem em ambas as direções e se espalham para regiões flanqueadoras adjacentes.
O aparecimento de fluorescência nas regiões flanqueadoras adjacentes à região de ativação confirma o transporte de neurof
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