Ablação neuronal direcionada usando microscopia de dois fótons em uma larava de peixe-zebra

Comece com uma larva de peixe-zebra transgênica anestesiada imobilizada em agarose e colocada em uma placa de Petri contendo uma solução anestésica.

Posicione-o sob um microscópio a laser de dois fótons, que usa dois fótons para imagens detalhadas.

Concentre-se nas camadas superior e inferior do cérebro para definir os limites da imagem.

Capture imagens em várias profundidades para observar os neurônios antes do tratamento a laser.

Ajuste o foco na região de interesse e ajuste o tamanho do quadro para refinar o foco nos neurônios.

Selecione e irradie os neurônios usando o laser de dois fótons.

O laser induz calor localizado, resultando em morte neuronal com danos mínimos ao tecido circundante. Capture a imagem.

Compare imagens pré e pós-tratamento para avaliar as alterações de fluorescência.

Reoriente os neurônios em planos mais profundos e repita a irradiação para tratar todos os neurônios na região de interesse.

Recapture a imagem e compare-a com a imagem pré-tratamento. A perda de fluorescência após o tratamento com laser confirma o sucesso da ablação neuronal.

Coloque a larva embebida em agarose sob um microscópio de varredura a laser de 2 fótons e inicie o sistema de microscopia. Abra