Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:58 min. • May 29th, 2025
Comece com um camundongo anestesiado com uma placa de cabeça presa sobre uma janela cortical de crânio fino preparada cirurgicamente.
Posicione o mouse em decúbito dorsal. Remova a pele medial da coxa para expor a veia femoral.
Injete um corante fluorescente conjugado na veia para marcar o plasma sanguíneo, permitindo a visualização dos vasos sanguíneos.
Suturar a incisão.
Vire o mouse e prenda a placa de cabeça em um arnês para estabilizar o mouse.
Transfira a configuração para um estágio de microscópio de dois fótons.
Adicione solução salina sobre a janela cortical. Abaixe a lente objetiva até que ela entre em contato com a solução salina.
Usando iluminação de campo claro, localize a região de imagem.
Mude para imagens de dois fótons.
O laser do microscópio concentra a luz infravermelha próxima de baixa energia no cérebro.
No ponto focal do laser, dois fótons combinam sua energia para excitar o corante, tornando os vasos sanguíneos fluorescentes.
Identifique um leito capilar - uma rede de pequenos vasos sanguíneos que conectam artérias a veias - e amplie-o.
Adquira imagens para analisar a microvasculatura do cérebro.
Neste procedimento, remova a pele da coxa esquerda medial do camundongo. Em seguida, localize a veia femoral. Usando uma seringa de 1 mililitro e uma agulha de calibre 30, retire 130 microlitros da solução de corante fluorescente. Injete 100 microlitros do corante lentamente na veia femoral.
Depois de remover a agulha, aplique uma pressão constante e suave no local da injeção para parar qualquer sangramento e deixe o corante circular por cinco minutos. Em seguida, feche o local da cirurgia com suturas. Vire cuidadosamente o mouse de bruços e coloque-o no arnês da placa da cabeça do mouse. Para imagens in vivo de dois fótons, mova o aparelho cirúrgico para o microscópio de dois fótons e certifique-se de manter o nível de anestesia do animal.
Em seguida, coloque uma pequena quantidade de solução salina a 0,9% no reservatório da placa da cabeça e abaixe a objetiva do microscópio para que ela entre em contato com a solução salina. Em seguida, localize a área de interesse, usando o objetivo de visualização de campo claro. Depois, comece a imagem de dois fótons. Localize um leito capilar na tela de visualização e amplie essa área usando o zoom óptico 2. Adquira imagens dos capilares usando o software de imagem de dois fótons.