Imagem de células vivas da migração nuclear glial de Muller durante a regeneração da retina do peixe-zebra

Comece com um explante retiniano dorsal embebido em agarose de um peixe-zebra transgênico, montado em um fluorodish com meio.

A retina exibe danos fotorreceptores induzidos pela luz e contém células gliais de Muller ou MGCs com núcleos que expressam GFP.

Coloque o prato em uma câmara de microscópio multifóton.

Usando iluminação de campo claro, concentre-se na retina.

Mude para o modo de fluorescência para localizar os MGCs.

Configure uma pilha z da camada de células ganglionares ou GCL para a camada nuclear externa ou ONL.

Comece a criar imagens ao vivo.

Os fotorreceptores danificados liberam TNF-α, ativando os MGCs.

Os núcleos MGC migram basalmente dentro da camada nuclear interna ou INL para replicar seu DNA.

Em seguida, os núcleos migram apicalmente para o ONL para sofrer mitose, produzindo progenitores neuronais.

Após a mitose, os núcleos e progenitores do MGC migram basalmente de volta para o INL.

Os progenitores proliferam, migram para o local da lesão e se diferenciam em fotorreceptores, permitindo a regeneração da retina.

Analise as imagens capturadas para visualizar a migração nuclear.

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