Imagem de lapso de tempo de células primárias do córtex cerebral de camundongo transfectadas

Pegue uma placa de vários poços revestida com polímero contendo células do córtex cerebral primário embrionário de camundongo, como células progenitoras e neuronais. As células progenitoras são transfectadas para expressar proteínas fluorescentes para marcação e rastreamento.

Transfira a placa para a câmara de incubação pré-aquecida de um microscópio de fluorescência invertida para um ambiente de imagem estável.

Localize a posição de referência na placa para obter localizações de imagem consistentes.

Selecione vários campos de imagem por poço com maior ampliação para maximizar a probabilidade de observar células transfectadas.

Em intervalos regulares, capture simultaneamente imagens de contraste de fase para revelar a morfologia e a dinâmica celular e imagens fluorescentes para monitorar a expressão de proteínas fluorescentes.

Compare imagens de contraste de fase de lapso de tempo e fluorescentes para rastrear a divisão e diferenciação de células progenitoras em linhagens neurais.

Para obter imagens de células transduzidas por retrovírus, coloque a placa de cultura de tecidos em uma câmara de imagem conectada a controladores de temperatura e dióxido de carbono para manter as células em condições constantes de 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.

Selecione uma posição no eixo XY para servir como ponto zero e calibre o ponto zero. Selecione 10 a 15 posições por poço para serem fotografadas com ampliação de 10 vezes. Configure o software para adquirir imagens de contraste de fase a cada cinco minutos e imagens de fluorescência a cada três horas para diminuir a fototoxicidade. Verifique e ajuste o foco nas primeiras três horas do experimento, pois ele pode mudar enquanto a temperatura se equilibra.