Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:56 min. • June 17th, 2025
Pegue uma placa de vários poços revestida com polímero contendo células do córtex cerebral primário embrionário de camundongo, como células progenitoras e neuronais. As células progenitoras são transfectadas para expressar proteínas fluorescentes para marcação e rastreamento.
Transfira a placa para a câmara de incubação pré-aquecida de um microscópio de fluorescência invertida para um ambiente de imagem estável.
Localize a posição de referência na placa para obter localizações de imagem consistentes.
Selecione vários campos de imagem por poço com maior ampliação para maximizar a probabilidade de observar células transfectadas.
Em intervalos regulares, capture simultaneamente imagens de contraste de fase para revelar a morfologia e a dinâmica celular e imagens fluorescentes para monitorar a expressão de proteínas fluorescentes.
Compare imagens de contraste de fase de lapso de tempo e fluorescentes para rastrear a divisão e diferenciação de células progenitoras em linhagens neurais.
Para obter imagens de células transduzidas por retrovírus, coloque a placa de cultura de tecidos em uma câmara de imagem conectada a controladores de temperatura e dióxido de carbono para manter as células em condições constantes de 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.
Selecione uma posição no eixo XY para servir como ponto zero e calibre o ponto zero. Selecione 10 a 15 posições por poço para serem fotografadas com ampliação de 10 vezes. Configure o software para adquirir imagens de contraste de fase a cada cinco minutos e imagens de fluorescência a cada três horas para diminuir a fototoxicidade. Verifique e ajuste o foco nas primeiras três horas do experimento, pois ele pode mudar enquanto a temperatura se equilibra.