JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:24 min • June 17th, 2025
Comece com um mouse anestesiado preso em um sistema de gaiola móvel.
O camundongo tem uma lente de índice de refração gradiente pré-implantada direcionada à amígdala do cérebro, onde os neurônios expressam uma proteína fluorescente sensível ao cálcio.
A superfície da lente é coberta para proteção.
Deixe o mouse despertar e, em seguida, aplique o fluxo de ar para rotação da gaiola sem atrito.
Remova a tampa da lente e posicione um microscópio miniaturizado acima do cérebro.
Ligue o LED do microscópio. Em seguida, alinhe o microscópio de forma que a lente fique centralizada no campo de visão.
Capture a imagem da lente e ajuste a posição do microscópio.
À medida que a gaiola gira, os movimentos das pernas do camundongo geram medo, estimulando os neurônios da amígdala.
Isso desencadeia um influxo de íons de cálcio, que se ligam a indicadores fluorescentes.
A luz LED excita esses indicadores ligados ao cálcio, fazendo com que eles fiquem fluorescentes.
A lente de índice de refração gradiente captura e transmite com eficiência essa fluorescência ao microscópio.
Isso permite imagens de cálcio em tempo real da atividade neuronal da amígdala.
Para avaliar a qualidade do implante da lente GRIN, coloque uma gaiola de carbono sob o mouse anestesiado na barra da cabeça de um sistema de gaiola de casa móvel e ligue o fluxo de ar para que a gaiola se mova livremente sem atrito. Use uma garra de microscópio e um manipulador estereotáxico para alinhar verticalmente um microscópio miniaturizado à estrutura, antes de abaixar o microscópio até que a superfície da lente GRIN implantada apareça no campo de visão da imagem dentro do software. Alinhe o centro da lente GRIN implantada com o centro do campo de visão e capture a imagem da superfície da lente GRIN implantada. Em seguida, levante lentamente a lente objetiva do microscópio enquanto observa a imagem quanto ao aparecimento de células que expressam GCaMP.