Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:18 min. • June 17th, 2025
Pegue os neurônios corticais primários de roedores cultivados em um prato revestido com fundo de vidro contendo mídia.
Essas células expressam uma proteína associada à ELA geneticamente codificada e um biossensor de cálcio.
Substitua a mídia por um tampão com baixo teor de cloreto de potássio.
Incubar para manter a atividade neuronal em repouso e os níveis basais de cálcio.
Monte o prato em um microscópio confocal stage e posicione o tubo de perfusão.
Usando iluminação de campo claro, concentre-se nos neurônios e, em seguida, mude para imagens de fluorescência.
Usando o laser do microscópio, excite o biossensor e registre a emissão de fluorescência para determinar os níveis basais de cálcio intracelular.
Em seguida, perfunda o prato com tampão de cloreto de potássio com alto teor de potássio.
A alta concentração de potássio despolariza os neurônios, abrindo canais de cálcio dependentes de voltagem nos terminais pré-sinápticos. Isso permite o influxo de cálcio, que inicia a atividade sináptica neuronal.
O aumento do cálcio intracelular se liga ao biossensor, causando uma mudança conformacional que aumenta a fluorescência.
Continue registrando a fluorescência para medir as mudanças em tempo re
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