JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:55 min • June 17th, 2025
Pegue um camundongo transduzido anestesiado implantado com uma lente de índice de gradiente direcionada ao córtex pré-frontal medial, onde os neurônios expressam indicadores de cálcio geneticamente codificados.
Remova a tampa da lente e limpe sua superfície para uma transmissão de luz clara.
Prenda o miniscópio ao suporte da lente.
Ajuste a posição do miniscópio para identificar o plano focal ideal. Esse ajuste garante uma visualização clara dos corpos celulares neuronais.
Desconecte o cabo e deixe o mouse se recuperar.
Conecte o cabo ao miniscópio e transfira o mouse para uma câmara com uma configuração de gravação comportamental.
Durante a imagem, o miniscópio emite luz para excitar os indicadores de cálcio, que fluorescem com o influxo intracelular de cálcio.
A lente de índice de gradiente retransmite esses sinais ópticos dos tecidos cerebrais profundos para o miniscópio, reduzindo a dispersão da luz e permitindo a visualização em tempo real da atividade neuronal.
Processe a atividade transitória de cálcio registrada com observações comportamentais para correlacionar a atividade neuronal a comportamentos específicos.
Depois de anestesiar brevemente o mouse com isoflurano, afrouxe o parafuso de travamento na base com uma pequena chave de fenda antes de remover a tampa protetora e limpe a superfície da lente GRIN com um cotonete embebido em acetona. Conecte o miniscópio ao cabo e inicie o NewView software para começar a identificar o melhor plano focal ajustando a posição do miniscópio em relação à base, apertando ou afrouxando levemente com a ajuda de uma pinça romba. Depois que o melhor plano focal for determinado, aperte o parafuso de travamento antes de desconectar o cabo e colocar o mouse de volta em sua gaiola inicial.
Ligue o software da câmera de comportamento para visualizar a arena de comportamento do mouse por meio de uma função de transmissão ao vivo. Ajuste manualmente o foco da câmera superior. Selecione Trigger Strobe e marque Ativar/desativar gatilho seguido de clicar no botão Gravar. Em seguida, use procurar para selecionar o local onde as gravações de comportamento serão salvas. Selecione o formato de imagem desejado.
Aproxime o mouse da arena e conecte o miniscópio ao cabo ligado ao sistema de aquisição de dados. Em seguida, coloque o mouse no centro da arena. No software da câmera de comportamento, clique em Iniciar Gravação.
No NewView, marque LED1, clique em Capturar e acione os botões para iniciar a gravação. Isso permite gravações simultâneas de imagens de cálcio e comportamento do camundongo. Clique em Parar após 3.000 quadros e salve os arquivos.