Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:54 min. • June 18th, 2025
Comece com um rato contido e acordado em um gabarito experimental, com a cabeça firmemente fixada no lugar.
Abra a câmara de gravação previamente implantada e remova a cobertura de gel de silicone.
Limpe qualquer tecido regenerado para acessar o cérebro.
Adicione uma gota de soro fisiológico para manter a hidratação.
Em seguida, conecte uma pipeta de gravação pré-cheia contendo corante azul de Chicago a um micromanipulador.
Abaixe a pipeta na câmara de registro até atingir a região alvo do cérebro.
A pipeta entra em contato com o neurônio e registra os sinais do neurônio sem penetrá-lo.
Ouça esses sinais neuronais como cliques audíveis e, em seguida, forneça pulsos elétricos através da pipeta.
Esses pulsos injetam o corante adjacente ao neurônio, permitindo a coloração precisa da região alvo do cérebro.
Essas técnicas de gravação e coloração justacelular visualizam com precisão o local de gravação e permitem o mapeamento preciso da atividade neural para a anatomia do cérebro.
Coloque o rato na meia de pano e transfira a meia de pano para um tubo rígido em um gabarito experimental apropriado. Prenda a placa de retenção da cabeça no rato à peça correspondente no gabarito. Em seguida, coloque uma porca 832 no parafuso de retenção da cabeça que é implantado no rato.
Em seguida, aparafuse uma haste rosqueada de aço inoxidável no parafuso principal. Depois disso, abra a câmara de gravação e remova o gel de silicone. Limpe a craniotomia usando uma pinça fina se o tecido tiver crescido novamente na craniotomia. Use anestesia com isoflurano durante este processo, se necessário.
Em seguida, conecte a pipeta ao micromanipulador motorizado. Mova a pipeta para o local de gravação desejado nos eixos anterior, posterior e lateral medial. Em seguida, avance a pipeta ventralmente através da dura-máter até que esteja aproximadamente 500 micrômetros dorsal do local de registro pretendido. Avance lentamente a pipeta enquanto ouve eventos de pico em um monitor de áudio do ampvol lificadotage gravado. Uma vez identificados os eventos de pico, continue a mover a pipeta cerca de 0 a 100 micrômetros até que o volume positivotage deflexões são maiores que aproximadamente 500 microvolts.
Para rotular o local de gravação, defina a fonte atual para 4 microamperes negativos com pulsos de dois segundos a 50% do ciclo de trabalho. E passe a corrente por quatro minutos para iontoforético injetar Chicago Sky Blue através da pipeta.