Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:06 min. • June 17th, 2025
Comece com larvas de peixe-zebra transgênicas anestesiadas em uma câmara de montagem contendo um tampão fisiológico oxigenado sob um estereomicroscópio.
O cerebelo no cérebro contém neurônios de Purkinje geneticamente modificados que expressam proteínas citoplasmáticas fluorescentes.
Remova o excesso de meio e, em seguida, adicione agarose derretida para imobilizar as larvas para uma imagem estável.
Oriente o lado dorsal das larvas para cima para visualizar o cerebelo.
Depois de solidificado, apare o excesso de agarose. Usando uma agulha de vidro, excise a pele pigmentada que cobre o cérebro para expô-la.
Vire o bloco de agarose em uma câmara de imagem contendo agarose derretida para imagem sob um microscópio invertido.
Adicione o tampão fisiológico para preservar a função neuronal.
Posicione a câmara sob um microscópio confocal invertido. Aplique luz de excitação para excitar as proteínas fluorescentes, permitindo a visualização dos neurônios marcados.
As células pigmentadas da pele, se não forem removidas, espalham e absorvem a luz de excitação, reduzindo a intensidade da fluorescência.
A remoção da pele melhora a penetração da luz para aumentar a intensidade da fluorescência, facilitando
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