Uma técnica para aspiração e processamento percutâneo de espermatozóides epidídimos

Comece com um paciente do sexo masculino com azoospermia, uma condição na qual o sêmen não possui gametas masculinos ou espermatozóides.

A área genital é desinfetada e coberta com um campo para expor apenas o escroto, órgão que abriga os testículos, que produzem espermatozoides.

Ilumine a região e identifique o epidídimo, estrutura responsável pela maturação e armazenamento dos espermatozoides.

Insira uma seringa contendo uma solução de cultura especializada para gametas no tecido epididimal.

Aplique pressão negativa enquanto punciona o tecido para extrair o líquido epididimal contendo espermatozóides.

Transfira o líquido coletado para um prato contendo a solução de cultura para preservar a viabilidade dos espermatozóides.

Usando um microscópio, conte os espermatozóides maduros e saudáveis que exibem motilidade.

Transfira a solução para um tubo e, em seguida, centrifugue para separar os espermatozóides e remover o sobrenadante.

Ressuspenda as células em uma solução de cultura fresca.

Os espermatozóides isolados estão agora prontos para uso em procedimentos de tratamento de infertilidade.

Para começar, reúna um pacote de instrumentos cirúrgicos, duas seringas, solução desinfetante, luvas de borracha estéreis e curativo adesivo. Examine o pacote de instrumentos cirúrgicos que foi submetido à esterilização a vapor de alta pressão quanto a danos. Coloque a embalagem na mesa de instrumentos e abra a camada externa. Em seguida, peça aos andrologistas que coloquem luvas de borracha estéreis.

Abra a camada interna da embalagem dos instrumentos cirúrgicos e verifique se a fita indicadora de esterilização está devidamente esterilizada. Em seguida, prepare duas seringas de 5 mililitros equipadas com agulhas de 0,7 mililitros para anestesia e cirurgia. Abra a ampola contendo injeção de lidocaína. Use uma seringa estéril de 5 mililitros para aspirar a solução de lidocaína e eliminar as bolhas de ar da seringa.

Agora, posicione o paciente preparado na mesa de operação em uma posição de litotomia. Depois de remover as calças, prenda a roupa superior acima do umbigo para expor totalmente o períneo e a parte inferior do abdômen abaixo do umbigo. Em seguida, ajuste o ângulo da lâmpada sem sombras para iluminar o escroto do paciente.

Use uma pinça oval para segurar uma bola de gaze estéril. Mergulhe a bola de gaze totalmente em uma solução desinfetante. E desinfete a pele, começando pela parte inferior do abdômen e movendo-se em direção à frente e parte interna das coxas, área perineal, pênis e escroto. Em seguida, coloque uma toalha quadrada estéril sob as nádegas do paciente. Espalhe uma toalha estéril ao redor da área cirúrgica, expondo totalmente o escroto em toda a área.

Usando uma pipeta Pasteur estéril, transfira aproximadamente 2 mililitros de solução de cultura G-MPOS-PLUS para a placa de cultura. Depois de fechar a tampa, entregue o prato à enfermeira na sala de cirurgia pela janela de transferência. Agora, coloque o prato de cultura sobre a toalha estéril na mesa do instrumento e abra a tampa.

Usando outra seringa de 5 mililitros, aspire aproximadamente 0,2 mililitros de solução de cultura G-MPOS-PLUS e remova as bolhas de ar. Em seguida, segure o escroto do paciente com a mão esquerda, prendendo o epidídimo que requer punção. Palpe o epidídimo com a mão direita para confirmar o local da punção cirúrgica.

Em seguida, com uma seringa de 5 ml contendo a solução de cultura G-MPOS-PLUS na mão direita, perfure perpendicularmente à pele no tecido epididimal. Enquanto mantém a pressão negativa, puncione repetidamente o tecido epididimal para permitir que o fluido entre pela agulha e, em seguida, retire a agulha de punção.

Injete o líquido epididimal extraído na placa de cultura. Depois disso, aspire a solução de cultura G-MPOS-PLUS próxima para enxaguar a seringa para maximizar a quantidade de líquido epididimal coletado. Agora, transfira a placa de cultura contendo o fluido de cultura G-MPOS-PLUS e o fluido epididimal para o técnico do laboratório de embriões através da janela de transferência.

Coloque a placa de cultura no palco de um microscópio óptico invertido e prenda-a. Ligue o interruptor de alimentação do microscópio e ajuste a intensidade da luz adequadamente. Em seguida, gire o conversor do microscópio óptico invertido. Selecione a lente objetiva de 10 vezes e gire as espirais de foco grosso e fino para ajustar a distância focal.

Uma vez localizados os espermatozóides do epidídimo, observe-os com aumento de 40 vezes para avaliar o número e a qualidade. Usando uma pipeta Pasteur estéril, transfira o líquido da placa de cultura para um tubo de centrífuga de 15 mililitros após observar espermatozóides ativos suficientes. Coloque o tubo de centrífuga na bandeja de equilíbrio e use um tubo de centrífuga da mesma especificação contendo água estéril para nivelar.

Em seguida, abra a porta da centrífuga. Coloque os tubos no slot de cartão simetricamente e feche a porta. Pressione o botão Iniciar para iniciar o processo de centrifugação. Uma vez concluído o processo, remova o tubo que contém o fluido epididimal da centrífuga. Em seguida, aspire suavemente o sobrenadante com uma pipeta Pasteur estéril e descarte o sobrenadante retirado.

Usando uma pipeta Pasteur estéril, transfira o sedimento do fundo do tubo da centrífuga para um novo tubo de centrífuga contendo aproximadamente 2 mililitros de solução de cultura G-IVF Plus. Pipete suavemente a solução para ressuspender completamente o sedimento. Transfira aproximadamente 0,5 mililitros de solução de cultura G-IVF Plus para o tubo da centrífuga. Sopre suavemente os espermatozóides epididimais na parte inferior para torná-los completamente suspensos e use-os para o procedimento ICSI.