Microinjeção estereotáxica de um vetor viral para manipulação gênica em um filhote de camundongo estriado

Pegue um filhote de camundongo geneticamente modificado carregando um STOP flanqueado por loxP que bloqueia a proteína fluorescente vermelha ou a expressão de RFP.

Prenda o filhote em uma estrutura estereotáxica feita sob medida e cubra-o com gelo para manter a anestesia.

Desinfete o couro cabeludo e marque lambda como ponto de referência.

Alinhe a agulha de injeção às coordenadas estriatais em relação ao lambda e perfure o crânio.

Retraia a agulha para a superfície do crânio e insira-a na profundidade do alvo.

Injete o vetor viral misturado com corante no estriado a uma taxa controlada. O vetor codifica proteínas fluorescentes verdes ou GFPs e Cre recombinase.

Retire a agulha lentamente para evitar o refluxo da solução.

Remova o filhote e permita a recuperação.

Nas células estriadas, o vírus libera seu genoma, possibilitando a expressão de Cre recombinase e GFP. Cre retira o STOP ladeado por loxP, ativando a expressão RFP.

A expressão simultânea de GFP e RFP confirma a manipulação gênica bem-sucedida.

Posicione o filhote com a luva na bandeja da cabeça e coloque um pouco de gelo picado ao redor da manga de látex para manter a anestesia da hipotermia. Em seguida, esfregue a cabeça do filhot