Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:06 min. • August 7th, 2025
Pegue um tubo de microcentrífuga contendo fator de crescimento nervoso ou NGF, uma proteína neurotrófica, e protamina, uma proteína transportadora carregada positivamente.
Complexos de protamina com NGF por meio de interações eletrostáticas que facilitam o encapsulamento e evitam a degradação.
Em um frasco de vidro, adicione etanol contendo excipientes lipídicos que imitam a composição lipídica das lipoproteínas de alta densidade ou HDL para a formação de nanopartículas.
Misture com etanol adicional para dispersão uniforme. Evaporar o etanol sob nitrogênio para formar uma fina película lipídica.
Adicione água ultrapura e homogeneize em alta velocidade para permitir a automontagem em nanopartículas protótipo que imitam HDL.
Introduza o complexo NGF-protamina nas nanopartículas e incube enquanto agita para promover o encapsulamento de NGF-protamina, preservando sua bioatividade.
Resfrie a suspensão para estabilização de nanopartículas, adicione a apolipoproteína AI, a proteína estrutural primária do HDL, e continue mexendo para integrar a proteína na estrutura da nanopartícula.
Essas nanopartículas que imitam HDL carregadas com NGF estão agora prontas para estudos adicionais.
Para começar, misture 10 microlitros de NGF com 10 microlitros de protamina USP em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro e deixe repousar por 10 minutos em temperatura ambiente para formar o complexo. Em seguida, adicione 59 microlitros de fosfatidilcolina e 11 microlitros de esfingomielina a um frasco de vidro.
Adicione também 4 microlitros de fosfatidilserina, 15 microlitros de oleato de colesterol e 45 microlitros de succinato de polietilenoglicol tocoferol. Misture e evapore o etanol sob uma corrente suave de nitrogênio por cerca de cinco minutos. Todos os excipientes devem formar uma película fina e oleosa no fundo do frasco para injetáveis de vidro.
Adicione 1 mililitro de água ultrapura ao frasco e homogeneize a 9.500 RPM por 5 minutos em temperatura ambiente para formar as nanopartículas protótipos ou NPs. Em seguida, adicione o complexo preparado aos protótipos de NPs. Incube a suspensão a 37 graus Celsius por 30 minutos, com agitação, usando uma pequena barra de agitação no frasco de vidro.
Resfrie os MPs mexendo em temperatura ambiente por mais 30 minutos. Após o resfriamento, adicione 106 microlitros de apolipoproteína A-I e mexa em temperatura ambiente durante a noite para formar o NGF HDL final imitando NPs.