Imagem in vitro em tempo real da ramificação axonal em neurônios corticais de camundongos

Pegue uma placa de imagem com fundo de vidro contendo neurônios corticais embrionários de camundongos.

Coloque o prato dentro da câmara ambiental de um microscópio de contraste de interferência diferencial, ou DIC, para manter a viabilidade celular durante a imagem.

A microscopia DIC divide a luz polarizada em dois feixes que atravessam a amostra.

Variações no índice de refração em todo o corpo de prova introduzem mudanças de fase entre esses feixes.

Quando os feixes se recombinam, sua interferência gera uma imagem de alto contraste, tornando visíveis estruturas celulares mais finas.

Identifique neurônios com axônios não ramificados e use imagens de lapso de tempo para visualizar a ramificação axonal.

Trate com netrina-1, uma pista de orientação extracelular que se liga aos receptores axonais e desencadeia exocitose localizada.

As vesículas exocíticas fornecem componentes de membrana aos locais enquanto o citoesqueleto é reorganizado para suportar a expansão da membrana.

Ao microscópio, essas alterações aparecem como pequenas saliências, marcando o início da ramificação axonal.

Com o tempo, essas saliências se desenvolvem em ramos axonais maduros, ilustrando o processo dinâmico do desenvolv