Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:29 min. • August 7th, 2025
Pegue um camundongo anestesiado com um monofilamento inserido em sua artéria cerebral média para induzir a oclusão.
Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, desencadeando isquemia focal.
A oclusão restringe o suprimento de oxigênio e glicose, causando depleção de ATP e despolarização neuronal.
Os neurônios despolarizados liberam excesso de glutamato, que se liga aos receptores pós-sinápticos, causando um influxo maciço de cálcio.
O cálcio intracelular elevado interrompe a função mitocondrial e promove a produção de ROS, iniciando danos neuronais.
Re-anestesiar o mouse.
Reabra a incisão e remova o monofilamento para obter a reperfusão.
A reintrodução repentina de oxigênio gera excesso de ROS de mitocôndrias disfuncionais, agravando a lesão neuronal.
Para mitigar isso, exponha o camundongo a uma mistura de gás com alto teor de dióxido de carbono para pós-condicionamento ácido ou APC após o início da reperfusão.
Isso aumenta a concentração de prótons no cérebro, inibindo os receptores, reduzindo o influxo de cálcio e prevenindo a excitotoxicidade mediada pelo cálcio.
Além disso, o APC estabiliza as mitocôndrias e inibe a produção de ROS, fornecendo neuroproteção.
55 minutos após o início da oclusão, reanestesiar o animal com isoflurano e posicioná-lo como antes. Em seguida, abra a incisão no pescoço e exponha novamente a artéria carótida comum. Após o período de oclusão, use uma pinça oftálmica para puxar suavemente o filamento para obter a reperfusão. Em seguida, transforme a sutura temporária em permanente, apertando o nó. Para o tratamento da acidose, troque o gás inalado pelo cone do nariz para 20% de dióxido de carbono, 20% de oxigênio e 60% de nitrogênio por cinco minutos. Depois de fechar a incisão com uma sutura cirúrgica interrompida, coloque o camundongo em uma gaiola aquecida a 30 graus Celsius até que o camundongo recupere a consciência.