Entrega intratecal de um composto de teste ao sistema nervoso central de ratos

Comece com um rato anestesiado com uma cânula guia implantada no canal espinhal lombar.

Insira um conjunto de fio de cateter através da cânula guia em um ângulo no espaço intratecal, onde o líquido cefalorraquidiano ou o LCR circulam.

Remova a cânula guia e avance lentamente o cateter mais fundo.

Em seguida, remova o fio completamente e conecte o cateter a um sistema de entrega.

Injete solução salina estéril no canal espinhal, garantindo a passagem clara.

Administre lentamente uma solução de composto de teste no LCR, seguida de uma lavagem com solução salina estéril.

Retire o sistema de entrega, corte o cateter e sele sua extremidade a quente.

Suture o cateter selado a quente no tecido conjuntivo e, em seguida, feche a pele sobre o cateter. Limpe o local e permita que o rato se recupere.

O composto de teste se espalha através do LCR para a medula espinhal e o cérebro, que compreendem o sistema nervoso central ou SNC.

Dentro do SNC, ele entra nos neurônios e oferece potencial terapêutico.

Para a colocação do cateter e injeção do composto, identifique as duas fossetas naturais entre os músculos acima da pelve raspada. E com uma mão segurando as fossas, use a outra mão para pressionar suavemente e sentir a coluna da direção caudal para a rostral para localizar o primeiro grande recuo entre as vértebras. Depois de identificar o espaço intervertebral entre as vértebras S1 e L6, mova-se ligeiramente rostralmente para identificar o espaço intervertebral entre as vértebras L5 e L6.

Use um bisturi para fazer uma incisão de no máximo 2 centímetros de comprimento na pele e na cápsula muscular neste local, ao longo da linha média da direção rostral para caudal, de modo que o local da injeção fique no centro da incisão. Use uma tesoura de dissecção para dissecar o tecido conjuntivo até que a camada muscular possa ser visualizada. Faça uma incisão de 1 centímetro na cápsula muscular, imediatamente lateral ao processo espinhal dorsal da vértebra lombar L6.

Posicione o conjunto da agulha da cânula guia próximo à face anterior da sexta vértebra lombar e empurre o conjunto para o espaço intervertebral ao longo da face anterior da sexta vértebra, de modo que a extremidade da agulha penetre no canal espinhal.

Use uma pinça romba para localizar os processos espinhais dorsais da vértebra lombar L6. Em seguida, empurre a agulha ao longo da face anterior da sexta vértebra para o espaço intervertebral.

Empurre a cânula guia no lugar ao longo da agulha. Remova a agulha e insira o conjunto do fio do cateter na cânula guia. Inclinando o cateter em um ângulo de aproximadamente 45 graus em relação ao canal espinhal, force a extremidade do cateter aproximadamente 0,3 centímetros para dentro do canal.

Remova o fio do estilete a aproximadamente 2,5 centímetros da ponta intratecal do cateter e avance o cateter para dentro do canal espinhal até que a marca de 2 centímetros no cateter seja visível abaixo do músculo. Quando o cateter estiver no lugar, remova a cânula guia para deixar o cateter e o fio estilete no lugar.

Avance o cateter no canal espinhal até que a marca de 2 centímetros esteja na entrada do canal e retire completamente o fio do estilete. O líquido cefalorraquidiano pode ser visualizado entrando no cateter implantado. Em seguida, conecte o conjunto do cateter de entrega à extremidade distal do cateter implantado através da extremidade da agulha de calibre 30

.

Em seguida, carregue 60 microlitros de solução salina estéril em uma seringa de 100 microlitros e carregue um bolus de 30 microlitros do composto de teste em uma segunda seringa. Conecte a seringa salina à extremidade do adaptador de tubo do conjunto do cateter de entrega e lave 20 microlitros de solução salina estéril no espaço intratecal.

Quando todo o soro fisiológico tiver sido lavado, substitua a seringa de soro fisiológico pela seringa carregada em bolus e injete 30 microlitros do composto de teste no espaço intratecal durante um período de 30 segundos. Quando todo o bolo alimentar tiver sido administrado, substitua a seringa carregada em bolus por outra seringa carregada com solução salina e lave o cateter com mais 40 microlitros de solução salina.

Quando o segundo volume de solução salina for administrado, retire o conjunto do cateter de entrega do cateter implantado e use um par de pinças de dissecção esterilizadas com esferas muito quentes para prender o tubo para cortar assepticamente e selar o cateter implantado. Use suturas de monofilamento absorvíveis para prender o cateter selado a quente ao tecido conjuntivo e, em seguida, use suturas não absorvíveis para fechar a pele. Em seguida, use gaze e soro fisiológico para lavar o sangue da pele e coloque o rato em uma incubadora aquecida com monitoramento até a decúbito total.