Avaliação do tratamento com plasma à pressão atmosférica em células de neuroblastoma privadas de glicose

Faça uma cultura de células de neuroblastoma em uma placa multipoços com meio.

Substitua o meio em poços por meios neuronais livres de glicose para induzir o estresse oxidativo.

Posicione a placa sob o bico de jato de plasma a uma distância ideal para uma exposição uniforme.

Trate poços selecionados com uma baixa dose de jato de plasma de pressão atmosférica à base de hélio (APPJ), que gera níveis controlados de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio.

Incube as células para permitir a ativação das vias de resposta ao estresse e a regulação positiva de enzimas antioxidantes em poços tratados com APPJ.

As células em poços não tratados sob privação de glicose sofrem mais danos celulares oxidativos.

Adicione o reagente de ensaio de viabilidade celular e incuba. As células viáveis reduzem o reagente a um produto colorido.

Meça a intensidade da cor usando um leitor de microplacas.

Os poços tratados com APPJ exibem maior intensidade de cor devido à maior viabilidade celular, enquanto os poços não tratados apresentam menor intensidade, confirmando o efeito neuroprotetor do APPJ sob privação de glicose.

Ajuste a distância entre o bico do tubo de quartzo e a plataforma onde a placa de 96 poços será colocada em três centímetros para garantir que o feixe possa tocar a superfície do meio de cultura. Antes do tratamento, troque o meio de cultura em cada poço para RPMI 1640 sem meio de glicose. Agora, coloque a placa sob o bico de jato de plasma de pressão atmosférica. Em seguida, trate as células em poços separados por 0, 1, 2, 4, 8 e 12 segundos.

Após o tratamento, incubar as células por uma hora em uma incubadora de células a 37 graus Celsius, após a incubação a 10 microlitros de solução do Kit de Contagem de Células 8 para cada poço. Em seguida, incube as células a 37 graus Celsius por quatro horas. Finalmente, meça a absorbância em 450 nanômetros com um leitor de microplacas.