Entrega intranasal de siRNA ao cérebro de camundongo usando um dispositivo de posicionamento

Comece com camundongos anestesiados colocados em um dispositivo de posicionamento com as costas paralelas ao apoio para as costas da cadeira e perpendiculares ao assento.

Os ratos são posicionados em uma postura de cabeça para baixo e para frente e presos com cintos de cadeira.

Usando uma micropipeta carregada com um complexo peptídeo-siRNA direcionado a neurônios, coloque uma gota perto de uma narina, permitindo que o camundongo inale a solução naturalmente.

Pressione suavemente a cabeça do camundongo para baixo durante a inalação para evitar que a solução escorra para os pulmões.

Faça uma breve pausa e repita a administração na outra narina.

Repita o procedimento para os ratos restantes.

O complexo penetra na mucosa nasal, de onde entra nos nervos olfatório e trigêmeo e viaja por eles para chegar ao cérebro.

Dentro do cérebro, o complexo se liga a receptores neuronais, sofre endocitose e facilita a entrega intracelular de siRNA.

O siRNA torna-se parte do complexo RISC, que, ao se ligar ao mRNA alvo, induz o silenciamento gênico.

Para iniciar este procedimento, avalie o nível de anestesia do reflexo bípede dos camundongos para manter o plano cirúrgico. Em seguida, coloque o dispositivo de