Imagem in vivo das respostas dos neurônios do gânglio geniculado usando microscopia epifluorescente

Comece com um camundongo anestesiado com um gânglio geniculado exposto cirurgicamente, um aglomerado de neurônios periféricos que processam o paladar.

Esses neurônios expressam GCaMP, um indicador de cálcio que fluoresce após a ligação do cálcio.

Remova qualquer líquido que cubra o gânglio para uma visualização clara.

Coloque o mouse em uma almofada absorvente sob um microscópio e localize o gânglio geniculado usando pontos de referência anatômicos.

Usando um filtro apropriado no escopo de epifluorescência, detecte a fluorescência verde dos neurônios que expressam GCaMP.

Em seguida, insira uma agulha dispensadora conectada ao tubo de entrega do saborizante na boca do mouse e entregue o saborizante.

O saborizante estimula as células receptoras do paladar, liberando ATP, que se liga aos receptores dos neurônios ganglionares, desencadeando o influxo de cálcio.

Esses íons de cálcio se ligam aos GCaMPs, induzindo a emissão de fluorescência.

Alinhe a câmera com o campo de visão do microscópio e sincronize a gravação de vídeo com a entrega de saborizantes para capturar a atividade neuronal em tempo real por meio de alterações de fluorescência.

Para executar o painel de saborizantes, use sucção para remover o líquido sobre o geniculado e coloque o mouse em uma almofada absorvente sob um microscópio de dissecação. Use o orifício deixado na bula, o orifício no osso temporal e o sétimo nervo para localizar o gânglio geniculado. E use o filtro FITC / GFP no escopo de epifluorescência para verificar se há neurônios ganglionares geniculados que expressam GCaMP individuais. Coloque a agulha dispensadora de uma linha de saborizante firmemente na boca do animal. Sincronize o início da gravação de vídeo com o início da apresentação do sabor, observando a transmissão ao vivo para obter respostas.