JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:13 min • June 17th, 2025
Comece com um camundongo anestesiado com um gânglio geniculado exposto cirurgicamente, um aglomerado de neurônios periféricos que processam o paladar.
Esses neurônios expressam GCaMP, um indicador de cálcio que fluoresce após a ligação do cálcio.
Remova qualquer líquido que cubra o gânglio para uma visualização clara.
Coloque o mouse em uma almofada absorvente sob um microscópio e localize o gânglio geniculado usando pontos de referência anatômicos.
Usando um filtro apropriado no escopo de epifluorescência, detecte a fluorescência verde dos neurônios que expressam GCaMP.
Em seguida, insira uma agulha dispensadora conectada ao tubo de entrega do saborizante na boca do mouse e entregue o saborizante.
O saborizante estimula as células receptoras do paladar, liberando ATP, que se liga aos receptores dos neurônios ganglionares, desencadeando o influxo de cálcio.
Esses íons de cálcio se ligam aos GCaMPs, induzindo a emissão de fluorescência.
Alinhe a câmera com o campo de visão do microscópio e sincronize a gravação de vídeo com a entrega de saborizantes para capturar a atividade neuronal em tempo real por meio de alterações de fluorescência.
Para executar o painel de saborizantes, use sucção para remover o líquido sobre o geniculado e coloque o mouse em uma almofada absorvente sob um microscópio de dissecação. Use o orifício deixado na bula, o orifício no osso temporal e o sétimo nervo para localizar o gânglio geniculado. E use o filtro FITC / GFP no escopo de epifluorescência para verificar se há neurônios ganglionares geniculados que expressam GCaMP individuais. Coloque a agulha dispensadora de uma linha de saborizante firmemente na boca do animal. Sincronize o início da gravação de vídeo com o início da apresentação do sabor, observando a transmissão ao vivo para obter respostas.