Isolamento e purificação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina recombinante
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:59 min. • August 7th, 2025
MOGtag é uma glicoproteína de oligodendrócitos de mielina recombinante fundida com etiquetas de solubilização e purificação para estudos experimentais de encefalomielite autoimune.
Para isolar o MOGtag, suspenda as células bacterianas que expressam MOGtag em um tampão de lise e incuba.
Enzimas e detergentes no tampão rompem os lipídios da membrana e degradam a parede celular.
Sonicar para lisar ainda mais as células, liberando corpos de inclusão insolúveis contendo MOGtag.
Centrifugue para peletizar os corpos de inclusão. Descarte o sobrenadante, ressuspenda o pellet em tampão e incuba.
Adicione o cloridrato de guanidina e incube para solubilizar o MOGtag.
Transfira as proteínas solúveis para uma resina de níquel carregada, misture e incube agitando para permitir que o MOGtag se ligue aos íons de níquel.
Centrifugue para granular o MOGtag ligado. Remova o sobrenadante, ressuspenda o pellet em um tampão de eluição e incube com agitação.
O imidazol no tampão de eluição libera MOGtag da resina.
Centrifugue novamente, colete o sobrenadante contendo MOGtag purificado e armazene-o para análise posterior.
Distribua as culturas uniformemente entre frascos de 250 mililitros compatíveis com centrifug
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