JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:15 min • June 17th, 2025
Comece com células de Schwann ou SCs, células gliais mielinizantes do sistema nervoso periférico, cultivadas em meio.
Transfira as células para um prato colorimétrico equipado com eletrodos em ambos os lados.
Coloque o prato em um campo elétrico pulsado de nanossegundos ou dispositivo nsPEF e defina a intensidade do campo elétrico desejado.
Aplique pulsos nsPEF girando cuidadosamente os eletrodos até que apareçam faíscas.
Imediatamente após a estimulação, separe os eletrodos e continue cultivando as células.
O nsPEF rompe as membranas SC, criando nanoporos transitórios que permitem o influxo de cálcio. As membranas eventualmente se fecham novamente.
O cálcio intracelular ativa proteínas de ligação ao cálcio, desencadeando vias de sinalização que regulam positivamente os genes envolvidos na progressão do ciclo celular.
A sinalização sustentada de cálcio também ativa fatores de transcrição que impulsionam a desdiferenciação de SCs em um fenótipo de reparo, seguido de proliferação.
Além disso, a secreção de fatores neurotróficos que sustentam a sobrevivência e o crescimento neuronal aumenta.
O modelo agora está pronto para estudar o papel dos SCs estimulados por nsPEF na regeneração do nervo periférico pós-lesão.
Para começar, ressuspenda as células RSC96 cultivadas em 1 mililitro de meio de cultura DMEM e transfira-as para placas colorimétricas com eletrodos em ambos os lados. Ligue o interruptor de alimentação do instrumento e gire o botão para definir as intensidades do campo elétrico. Com cuidado, gire os eletrodos até que apareçam faíscas, permitindo que as células recebam 5 pulsos de campos elétricos pulsados de nanossegundos de acordo com as intensidades de intensidade de campo predefinidas. Separe imediatamente os dois eletrodos após o tratamento.