Uma injeção de vetor viral na medula espinhal de rato para rastreamento neuronal retrógrado

Pegue um microinjetor com uma microagulha contendo um transporte retrógrado altamente eficiente ou vetor viral HiRet.

As glicoproteínas no envelope do vírus HiRet facilitam sua entrada nos neurônios por meio de sinapses. O vírus também carrega um gene que codifica uma proteína fluorescente.

Pegue um rato anestesiado com a medula espinhal lombar exposta de 1 a 4.

Usando a linha média da medula espinhal como referência, posicione a agulha acima do local da injeção.

Abaixe a agulha na medula espinhal.

Comece a administrar o vírus a uma taxa controlada.

Dê tempo suficiente para a difusão viral antes de retirar a agulha.

Os receptores neuronais se ligam às glicoproteínas virais, facilitando a entrada do vírus pela sinapse e o transporte através do axônio para o soma, um processo chamado transporte retrógrado.

O gene viral é integrado ao genoma do hospedeiro, permitindo a expressão de proteínas fluorescentes.

Esses vírus também viajam através de neurônios conectados, permitindo o rastreamento de vias neuronais.

Coloque a agulha na linha média da medula espinhal e use a escala Vernier no micromanipulador para direcionar a agulha lateralmente 0,8 milímetros. Em seguida, abaixe a agulha até a medula espinhal até que ela recue, mas não perfure a dura-máter. E use um movimento rápido de torção para perfurar a dura-máter com a agulha até que a ponta da agulha afunde a uma profundidade de 1,5 milímetros.

Assim que a agulha estiver no lugar, programe o injetor para entregar o vírus a uma taxa de 400 nanolitros por minuto e confirme se o vírus está entrando na medula espinhal observando o progresso da frente do corante. Uma vez terminada a injeção, deixe a agulha descansar na medula espinhal por dois a cinco minutos para facilitar a difusão do vírus, antes de retirar lentamente a agulha para posicionamento no próximo local de injeção.