Entrega de substâncias direcionadas ao cérebro do camundongo por meio de infusão na artéria carótida interna

Pegue um camundongo anestesiado com uma artéria carótida comum exposta ou CCA, que se bifurca na artéria carótida externa ou ECA e na artéria carótida interna ou ICA.

Suture firmemente o ECA distal, coloque um nó solto perto da bifurcação e, em seguida, prenda o CCA e o ICA para restringir o fluxo sanguíneo.

Incisar o ECA e, em seguida, inserir um capilar ligado a uma seringa contendo a substância de ensaio.

Avance o capilar entre a bifurcação e o clipe CCA e, em seguida, prenda-o apertando o nó ECA proximal.

Remova o clipe ICA e infunda a substância para entrega direcionada ao cérebro, ignorando a circulação sistêmica.

A substância atravessa a barreira hematoencefálica para atingir o parênquima cerebral.

Uma vez que a ECA e a ACI estejam expostas, use uma pinça para colocar um segmento de sutura de náilon de 1 centímetro sob a artéria carótida externa e, em seguida, coloque um segundo segmento de 1 centímetro. Em seguida, dê um nó permanente no ponto mais alto possível do ECA.

No ponto mais baixo possível do ECA imediatamente acima da bifurcação do CCA, dê um nó removível mais solto. Em seguida, use clipes de vaso para fechar o CCA no ponto mais baixo possível e fechar o ICA.

Fechar adequadamente a artéria carótida interna antes de fazer um pequeno corte na artéria carótida externa evitará o sangramento.

Agora, usando uma tesoura de mola de microdissecação, faça um corte de 2 milímetros no ECA entre os dois nós.

É importante manter o corte pequeno, pois um corte grande causará vazamento da substância a ser infundida.

Monte o sistema de infusão conectando 6 polegadas de tubo capilar a uma seringa de tuberculina contendo 250 microlitros da substância a ser infundida. Em seguida, insira suavemente a ponta do tubo capilar na incisão no ECA. Continue avançando a ponta até atingir a metade do caminho entre a bifurcação e o clipe no CCA.

Amarre o nó ECA inferior. Verifique se o nó está solto o suficiente para permitir a fluidez capilar e apertado o suficiente para evitar vazamentos. Em seguida, remova o clipe do ICA. Aplique pressão suavemente no pistão da seringa, permitindo a infusão da substância a aproximadamente 10 microlitros por segundo.

Após a perfusão da substância de ensaio, voltar a colocar o clipe no ICA. Remova suavemente o tubo capilar e, em seguida, amarre completamente o nó ECA inferior. Remova o clipe do ICA e do CCA. Em seguida, remova o retrator ou os ganchos de tecido e o travesseiro.

Limpe a área a ser suturada com solução salina estéril e, em seguida, feche a incisão com suturas de náilon. Depois de administrar um agente anti-inflamatório e analgésico aprovado para aliviar o desconforto pós-operatório, coloque o animal em uma gaiola sobre uma almofada de aquecimento por pelo menos uma hora e monitore a recuperação.