Transplante de células precursoras de interneurônios no cérebro de um filhote de camundongo

Comece com um filhote de camundongo receptor anestesiado. Prenda sua cabeça com fita adesiva, garantindo que o crânio permaneça exposto.

Use o lambda de referência anatômica para localizar a região do cérebro alvo.

Posicione uma micropipeta sobre a região alvo, carregada com uma suspensão de células precursoras de interneurônios capazes de se diferenciar em interneurônios maduros.

Essas células precursoras são derivadas do córtex, estriado ou hipocampo de um filhote de doador no mesmo estágio de desenvolvimento do receptor.

Injete a suspensão no cérebro para realizar um transplante homotópico, no qual os precursores são entregues à sua região de origem, ou um transplante heterotópico, onde são introduzidos em uma região diferente do cérebro.

Deixe a suspensão difundir antes de retrair a micropipeta para evitar o refluxo.

Transfira o filhote para uma almofada de aquecimento para recuperação.

A sobrevivência e a maturação dos precursores do doador no cérebro do filhote receptor agora podem ser avaliadas.

Carregue uma micropipeta de ponta fina com óleo mineral. Conecte a micropipeta a um injetor de nanolitros e prenda o aparelho de injeção de nanolitros a um manipulador conectado a uma base magnética. Enquanto o primeiro filhote está sendo anestesiado no gelo, pipete a solução celular várias vezes para garantir uma distribuição celular homogênea.

Ejete o óleo mineral e encha completamente a pipeta com a suspensão de célula única. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, coloque o filhote em uma tampa de placa de Petri com a cabeça apoiada em massa adesiva de modo que o topo da cabeça fique relativamente plano.

Cubra a cabeça com um pedaço de fita adesiva com um orifício de diamante, puxando a fita esticada até que a pele seja esticada para que a cabeça fique firmemente presa e lambda fique visível através do orifício. Mova o filhote preso sob o injetor de nanolitros e abaixe a micropipeta de modo que a ponta fique diretamente acima do lambda.

Observe as coordenadas x, y no manipulador e ajuste os botões do manipulador até que a micropipeta esteja posicionada nas coordenadas apropriadas ao longo dos eixos mediolateral e ântero-posterior da cabeça. Abaixe a micropipeta até que a ponta crie uma pequena concavidade na pele e gire o botão do manipulador do eixo z com firmeza, mas suavemente, para conduzir a micropipeta através da pele e do crânio até o cérebro.

Retraia ligeiramente a micropipeta até que a ponta esteja rodeada por um cone de pele, em forma de tenda, e visualize as coordenadas ao longo do eixo z. Em seguida, abaixe a micropipeta até a profundidade experimental apropriada e injete as células. Aguarde 15 segundos após as células terem sido entregues antes de retrair a micropipeta e repita a injeção em um segundo local, se desejar. Coloque o filhote em uma almofada de aquecimento e monitore até que a recuperação total seja alcançada antes de transferir de volta para a gaiola doméstica.