Entrega intratecal de vírus em um modelo de camundongo para tratamento de doenças do sistema nervoso central

Encha uma seringa com uma solução contendo vírus adeno-associados, ou AAV, e lidocaína, um anestésico local.

Coloque um rato acordado em uma posição de bruços e cubra a parte superior do corpo.

Segure a cintura pélvica do rato e raspe a parte inferior das costas para expor a pele. Esterilize-o com iodo e etanol.

Localize a lacuna na parte inferior da coluna e pressione suavemente para marcá-la.

Gire a cauda para alinhar a coluna e insira a seringa verticalmente.

Ajuste o ângulo até que ocorra um movimento da cauda, confirmando a entrada da agulha no espaço intratecal onde o líquido cefalorraquidiano ou o LCR fluem.

Injete lentamente a solução para uma distribuição uniforme.

As partículas virais se ligam aos neurônios, entram no interior e liberam seu material genético no núcleo, permitindo a expressão gênica direcionada.

A lidocaína bloqueia temporariamente os sinais nervosos, causando paralisia de perna de curto prazo, confirmando o parto bem-sucedido no LCR.

Este protocolo estabelece a administração intratecal como um método eficaz para o tratamento de doenças do SNC.

Antes de iniciar o procedimento, conecte uma agulha de calibre 27 a uma seringa Hamilton de 25 microlitros e alinhe a ponta chanfrada da agulha com a escala volumétrica na seringa, em seguida, carregue cuidadosamente 8 microlitros de 4 vezes 10 elevado à 10ª cópia do genoma da solução do vírus na seringa, tomando cuidado para evitar bolhas.

Em seguida, coloque um camundongo acordado de 30 a 70 dias de idade, 12 a 30 gramas, em uma peça de cama em decúbito ventral em um capuz de biossegurança e cubra a parte superior do corpo com gaze estéril para acalmar o rato e evitar ser mordido. Segure firmemente o mouse na cintura pélvica, com o polegar de um lado e o indicador e o dedo médio do outro lado, mantendo a pele entre as cinturas pélvicas bilaterais esticada com o polegar e o indicador, depois raspe o pelo entre as cinturas pélvicas bilaterais e esterilize a pele exposta com um esfoliante à base de iodeto e etanol 70%.

Para a administração intratecal direta da solução de vírus adeno-associado, palpe o espaço intervertebral ao longo da linha média entre as cinturas pélvicas bilaterais e use uma unha para deprimir um recuo na pele para indicar o espaço intervertebral L5 a L6. Gire a base da cauda levemente e suavemente para revelar a linha média da coluna vertebral e ajuste o chanfro da agulha em direção à cabeça do animal. Com o mouse firmemente fixado na posição, alinhe a agulha ao longo da linha média da coluna e insira a agulha suave e verticalmente no centro do recuo, mantendo a seringa em um plano sagital central.

Quando a agulha entrar em contato com o osso, diminua lentamente o ângulo para aproximadamente 30 graus e deslize a agulha para o espaço intervertebral. Um movimento repentino da cauda é um sinal de uma entrada bem-sucedida no espaço intradural. Quando a agulha entra no espaço intervertebral, a ponta fica firmemente presa. Injete a solução vetorial e mantenha a agulha dentro do espaço intradural por um minuto, depois retire lentamente a agulha com rotação para minimizar o vazamento.