Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:28 min. • June 17th, 2025
Comece com um camundongo imunocompetente anestesiado com células tumorais que expressam luciferase implantadas no tecido cerebral.
O camundongo também é administrado com luciferina, um substrato para a enzima luciferase.
A luciferina circula na corrente sanguínea, atravessa a barreira hematoencefálica e atinge as células tumorais que expressam luciferase.
Configure o sistema de imagem com parâmetros para medir sinais bioluminescentes de células tumorais que expressam luciferase.
Coloque o camundongo anestesiado na câmara de imagem de bioluminescência e adquira imagens.
A luciferina entra na célula e interage com a enzima luciferase, produzindo um sinal bioluminescente proporcional à contagem de células tumorais.
Use a ferramenta de região de interesse para definir uma área de sinal e quantificar o sinal bioluminescente.
Para avaliar o crescimento do tumor, repita a imagem ao longo de vários dias e meça o sinal de luminescência da mesma área.
Com o tempo, as células que expressam luciferase começam a proliferar, formando um glioblastoma ou tumor.
O aumento nos sinais de luminescência confirma o crescimento do glioblastoma.
Para obter imagens do crescimento do tumor intracraniano, primeiro inicialize a estação de imagem conforme demonstrado.
Em seguida, depois de confirmar o nível apropriado de sedação por pinça de cauda, configure os parâmetros do sistema de imagem conforme demonstrado, com exceção de selecionar Automático para o tempo de exposição. Quando o sistema de imagem estiver pronto, coloque os mouses na estação de imagem e selecione Adquirir para obter imagens da expressão da luciferase. Quando a imagem tiver sido adquirida com sucesso, selecione a ferramenta de região de interesse na paleta de ferramentas e Automático no ícone de círculo.
Circunde as áreas de sinal para definir as regiões de interesse. E então obter medições das regiões como unidades de fótons por segundo por esterradiano por centímetro quadrado. Finalmente, remova os camundongos da câmara de imagem e monitore os animais portadores de tumor até que estejam totalmente recuperados.