Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:39 min. • June 17th, 2025
Pegue uma lamínula com neurônios primários geneticamente modificados em uma câmara de imagem cheia de um tampão de imagem.
Essas células expressam um indicador redox baseado em proteína fluorescente na matriz mitocondrial.
Posicione a câmara sob um microscópio de fluorescência, identifique as células sob luz visível e mude para a imagem de fluorescência.
Aplique dois comprimentos de onda de excitação para estimular o indicador e medir a emissão de fluorescência.
A razão de intensidade de fluorescência nesses comprimentos de onda reflete o estado de oxidação mitocondrial.
Introduza NMDA para ativar os receptores NMDA celulares, causando influxo intracelular de cálcio.
O aumento desencadeia a captação de cálcio mitocondrial, induzindo a produção de ROS e
a oxidação
mitocondrial.O ROS oxida o indicador, alterando sua fluorescência e aumentando a relação do sinal.
Introduza agentes oxidantes para oxidar totalmente o indicador, maximizando a relação do sinal.
Remova o tampão e, em seguida, introduza agentes redutores para reduzir completamente o corante, minimizando a proporção do sinal.
Use as proporções de sinal máximo e mínimo para calibrar e quantificar a oxidação mitocondrial induzida por NM
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