Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:58 min. • August 7th, 2025
Pegue uma microagulha de quartzo com orifícios personalizados, conectada a uma seringa cheia de água e conectada a uma microbomba para controlar a taxa de entrega.
Pegue um rato seguro e anestesiado com o local de injeção exposto.
Posicione a microagulha e coloque um filme de parafina por baixo. Coloque uma gota da solução injetável sobre ele.
Retraia a água para criar uma bolha de ar e, em seguida, abaixe a microagulha para extrair a solução.
Permita que uma gota se forme, garantindo uma passagem clara.
Use uma agulha afiada para perfurar a membrana do cérebro.
Insira a microagulha enquanto estiver ajustada em uma velocidade de entrega baixa para evitar a penetração de fragmentos de tecido na agulha.
Uma vez posicionado, vá um pouco mais fundo. Pare a entrega e levante-a novamente para evitar o refluxo.
Inicie a entrega com maior velocidade. Os orifícios na agulha garantem uma distribuição ideal da solução injetada.
Aguarde tempo suficiente antes de retirar a agulha para facilitar a difusão.
Corte um pequeno pedaço de filme plástico de parafina e coloque-o no crânio. Usando a pipeta de 10 microlitros, faça uma gota da solução para aplicar no filme plástico de parafina. Pare a bomba. Recupere levemente o empurrador da bomba e crie uma pequena bolha de ar no capilar puxando suavemente o pistão da seringa de microinjeção.
Abaixe a ponta da agulha até atingir a gota. Retirar a amostra puxando o pistão da seringa de microinjecção muito lentamente, evitando a formação de bolhas. Substitua o empurrador da bomba em contato com o pistão e ligue a bomba a uma vazão de 0,3 microlitros por minuto.
Em seguida, espere até a formação de uma gota antes de prosseguir para a próxima etapa. Depois, diminua o fluxo para 0,1 microlitros por minuto. Corte a dura-máter com uma agulha de ponta chanfrada de aço inoxidável e abaixe lentamente a agulha para entrar no tecido cerebral. Quando a posição desejada for alcançada, desça mais 0,1 milímetros e pare a bomba.
Levante o braço estereostático em 0,1 milímetros e ligue a bomba novamente a 0,3 microlitros por minuto. Depois disso, inicie o cronômetro e a injeção. Monitore o movimento da bolha durante a injeção. No final, pare a bomba e espere cinco minutos antes de recuperar lentamente a agulha.