Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:31 min. • August 7th, 2025
Pegue um rato anestesiado e aplique lubrificante para os olhos.
Raspe o membro alvo, esterilize a pele e posicione o rato para garantir o acesso ideal ao músculo alvo.
Levante e faça uma incisão na pele para expor o músculo.
Consulte as fotografias das placas terminais motoras ou MEPs, as regiões onde os terminais do axônio do neurônio motor fazem sinapse com as fibras musculares para formar junções neuromusculares.
Mapeie mentalmente a região MEP no músculo exposto.
Pegue uma micropipeta de vidro contendo um marcador fluorescente.
Injete o marcador por via intramuscular em vários pontos ao longo da região MEP.
Remova qualquer excesso de marcador, feche a incisão e administre um analgésico.
A injeção aumenta a disponibilidade do traçador nas junções neuromusculares, facilitando sua endocitose nos terminais axônicos.
Os traçadores encerrados nas vesículas são então transportados retrógradamente para os corpos celulares dos neurônios motores na medula espinhal.
A presença de neurônios motores marcados com marcadores na medula espinhal sugere o potencial neuroterapêutico da entrega direcionada ao MEP.
Para injetar o músculo vivo nas placas terminais do motor, primeiro use um extrator de micropipeta para puxar micropipetas de vidro graduadas equipadas com êmbolos. Em seguida, usando um microscópio de dissecação, quebre as pontas das micropipetas com um par de pinças de modo que o diâmetro interno de cada lúmen seja de aproximadamente 0,5 milímetros. Em seguida, encha as pipetas puxadas com fluoro-ouro.
Agora, aplique lubrificante ocular em um animal anestesiado e raspe o membro a ser injetado. Use gaze para limpar a área raspada com três esfoliações alternadas de clorexidina e álcool 70%. Em seguida, coloque o animal em uma almofada limpa para permitir o acesso ao músculo alvo. Quando o animal estiver em posição, use uma pinça com alças de dente para levantar a pele sobre o músculo alvo para longe da musculatura subjacente e use uma tesoura cirúrgica para fazer uma incisão na pele.
Tome cuidado para que a incisão seja grande o suficiente para expor completamente o músculo de interesse, com uma interrupção mínima da fáscia. Em seguida, usando as fotografias da placa terminal do motor para transpor mentalmente a localização e a forma da região da placa terminal do motor de interesse para o músculo, e administrou 3 a 4 injeções de 1 a 2 microlitros de fluoro-ouro ao longo de todo o comprimento da região da placa terminal do motor.
Após a última injeção, limpe suavemente o músculo para remover qualquer infiltração. Em seguida, use uma pinça romba para aproximar as duas extremidades da pele incisa. Feche a ferida com clipes cirúrgicos e infiltre toda a extensão da ferida com o anestésico local apropriado.