Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:57 min. • June 18th, 2025
Comece com um pequeno RNA interferente que suprime a expressão da proteína príon, uma proteína ligada a doenças neurodegenerativas do príon.
Adicione uma suspensão de lipossomas catiônicos.
O siRNA carregado negativamente se liga à superfície do lipossomo carregado positivamente.
Introduza o peptídeo RVG-9r, uma glicoproteína do vírus da raiva ligada a uma cauda de poliarginina.
Os resíduos de arginina facilitam a ligação RVG-9r-siRNA.
Injete os complexos lipossomo-siRNA-peptídeo na veia da cauda de um camundongo anestesiado.
Os LSPCs circulam pela corrente sanguínea e chegam ao cérebro.
O peptídeo RVG-9r se liga aos receptores nicotínicos de acetilcolina nas células endoteliais, desencadeando a transcitose mediada por receptores através da barreira hematoencefálica.
Dentro do cérebro, o RVG-9r se liga aos receptores neuronais de acetilcolina, facilitando a endocitose do LSPC e a liberação de siRNA.
O complexo de silenciamento induzido por RNA se liga ao siRNA.
A fita passageira se dissocia, enquanto a fita guia se liga e cliva o mRNA de PrP, impedindo a tradução e reduzindo a expressão de PrP.
Adicione 20 microlitros da suspensão de lipossomas de 4 nanomoles a 200 microlitros de uma solução de siRNA estoque de 20 micromolares e incube por 10 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, adicione 80 microlitros de um estoque de 500 micromolares de peptídeo direcionado RVG-9r à solução de lipossomas de siRNA e incube por 10 minutos em temperatura ambiente.
Depois de anestesiar um camundongo usando 2 a 3% de isofluorano em oxigênio, cubra os olhos do camundongo com pomada oftálmica e confirme a anestesia realizando uma pinça no dedo do pé. Prossiga apenas se uma reação estiver ausente. Enquanto mantém a anestesia, coloque o mouse de costas ou de lado para acessar a veia da cauda.
Limpe a cauda com etanol a 70% e, em seguida, use uma seringa de insulina de calibre 26 para injetar 300 microlitros de LSPCs ou PALETS na veia da cauda. Comece a injetar distalmente e mova-se proximalmente se a veia entrar em colapso ou se romper. Coloque o mouse em uma gaiola limpa até que ele mantenha a decúbito esternal.